熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項

更新時間：2021-01-08

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高通量的96孔PCR板和8聯管是在聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中，主要作為參與擴增反應的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。醫療級聚丙烯（PP）材質因其*的純凈度和穩定性，能更好適應PCR反應過程中反復高低溫設定，并且能夠實現高溫高壓滅菌操作，常常被用于PCR耗材的生產。隨著熒光定量PCR技術的普及，該技術被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫藥等領域，不僅應用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA，RNA的研究領域。

如何正確使用96孔PCR孔板

PCR板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR儀（如伯樂CFX系列，ABI 7500fast 以上型號， Roche 480系列），但如果熒光定量PCR儀是底部光源的，則應選擇透明的。
PCR板根據裙邊設計又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設計模式，不同廠家的熒光定量PCR儀會設計不同的切角或邊緣凸起，請選擇適合該PCR儀的板子。
PCR板又分100ul體積（矮板）和200ul體積（高板），根據機型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導致數據失真。
當使用96孔板做熒光定量PCR實驗的時候，推薦使用光學膜代來密封反應孔。正確的封膜方法是：先沿著96孔板的縱向壓膜，然后橫向，后沿著板的邊緣按壓使之密封。具體手法見下面圖示：

加樣后會在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應體系內也會有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用的微孔板離心機解決上述問題。

PCR板屬于一次性消耗品，生產一次成型，不建議剪開使用容易造成實驗誤差增加，不能清洗或部分重復利用。不要為了節省一點小錢，而給實驗帶來后續分析上的困擾。

樣本量少，用8聯管做實驗又該注意哪些呢？

8聯管也分乳白和透明兩種，選擇方式和孔板一樣，根據PCR儀的熒光信號采集方式決定。
8聯管同樣也有0.1ml（矮管）和0.2ml（高管），根據PCR儀的加熱模塊體積確定。
8聯管的蓋子一般有光學平蓋和凸型圓蓋之分，光學平蓋適用于熒光定量PCR，圓蓋適用于普通PCR。
使用單管或8聯管做實驗，并且樣本數量不多的時候，建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱地安放樣品，是縱向放置，并且優先放在第6列或第7列，然后逐漸向兩邊放置。這樣做的好處是熱蓋壓下來的時候不至于發生傾斜，各個反應管的受力和受熱都比較均勻，提高孔與孔之間的數據精密性。也可以在加熱模塊四角的位置，放置4個單管平衡熱蓋壓力，避免擴增少量樣本時出現管子變形的情況。
管蓋沒有蓋好造成PCR反應液熱蒸發，影響反應溫度的準確控制及反應也各成份的濃度，同時也成為一個污染源。不但會因壓蓋時由于粗心或者用力不均致使部分蓋子變形，而且還會造成樣品的交叉污染，所以我們推薦用獨立管蓋的8聯管，每管蓋一體，確保樣本獨立反應，避免交叉污染。

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熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項