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PCR蓋緊蓋子試劑蒸發(fā)問題詳解

更新時(shí)間:2023-06-30      瀏覽次數(shù):627

其實(shí)試劑的蒸發(fā)是PCR實(shí)驗(yàn)中常見的問題之一,影響試劑蒸發(fā)的因素也比較多。

蒸發(fā)是指試劑在PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,反應(yīng)液在高溫下氣化,又凝結(jié)在管壁或頂蓋上,形成水霧或水珠,或直接從管蓋或覆膜的氣隙中溢出,造成反應(yīng)液濃度變化、反應(yīng)液量減少,有的甚至蒸干,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)效等。

影響試劑蒸發(fā)的因素主要有以下三點(diǎn):

01熱蓋壓力、溫度

在PCR實(shí)驗(yàn)中,我們一般通過(guò)加熱蓋的辦法來(lái)防止試劑蒸汽的凝結(jié),熱蓋溫度一般比反應(yīng)液的溫度高,以防止蒸汽凝結(jié)。

PCR 儀的熱蓋大致可以分為以下四種:非可調(diào)式熱蓋、可調(diào)節(jié)式熱蓋、自適應(yīng)式熱蓋和自動(dòng)式熱蓋。而可調(diào)節(jié)式熱蓋利用手?jǐn)Q壓緊式,擰不緊會(huì)發(fā)生試劑蒸發(fā),通過(guò)增加熱蓋壓力可以盡量減少邊緣蒸發(fā)的現(xiàn)象。有時(shí)擰得過(guò)緊反而可能出現(xiàn)壓壞管子、擰壞旋鈕的情況。通常,采用電動(dòng)智能熱蓋,能夠自動(dòng)感應(yīng)不同高度的耗材,自動(dòng)壓緊耗材,壓力均勻且恒定,從而能夠減少試劑蒸發(fā)和人工誤差,提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度和可重復(fù)性。

02耗材形變

對(duì)于蒸汽的泄漏,大部分人認(rèn)為是熱蓋的壓力不夠所致。熱蓋的壓力固然很重要,但這僅僅是一個(gè)方面,其實(shí)耗材也很關(guān)鍵。

PCR 孔板通常為塑料材質(zhì),在受熱后發(fā)生膨脹,產(chǎn)生較大地變形,用于放置 PCR 孔板的 PCR 金屬基座則受熱膨脹率極小,PCR 孔板受熱膨脹后不能正常沿平面延展進(jìn)而中間形成拱起狀態(tài),從而造成上方熱蓋不能全面地與 PCR 孔板上表面充分接觸,造成溫度、壓力不均,引起 PCR 孔板邊緣試劑的蒸發(fā),影響 PCR 檢測(cè)效果。

03耗材密封不嚴(yán)

熱蓋與耗材壓緊并不等于蓋緊了 PCR 管蓋,PCR 孔板質(zhì)量參差不齊。優(yōu)質(zhì)的耗材,管口和蓋子表面光滑,盒蓋后密封性好,不易泄漏。而劣質(zhì)耗材,管口不平,有徑向紋路,容易造成泄漏,甚至蒸干。

因此在PCR實(shí)驗(yàn)中,盡量選擇優(yōu)質(zhì)、合適的耗材。同時(shí)也可以擴(kuò)大反應(yīng)體系,盡量減少體系蒸發(fā)對(duì)反應(yīng)的影響。

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